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Miembro Maestro
Los estudios preclínicos de la vacuna de ARNm del COVID-19 BNT162b2, desarrollada por Pfizer y BioNTech, mostraron efectos hepáticos reversibles en los animales que recibieron la inyección de BNT162b2.
Además, un estudio reciente demostró que el ARN del SARS-CoV-2 puede transcribirse inversamente e integrarse en el genoma de células humanas. En este estudio, investigamos el efecto del BNT162b2 en la línea celular de hígado humano Huh7 in vitro. Se expusieron células Huh7 a BNT162b2 y se realizó una PCR cuantitativa del ARN extraído de las células.
Se detectaron altos niveles de BNT162b2 en las células Huh7 y cambios en la expresión génica del elemento nuclear intercalado largo-1 (LINE-1), que es una transcriptasa inversa endógena. La inmunohistoquímica con anticuerpos contra la proteína de unión al ARN del marco de lectura abierto-1 (ORFp1) de LINE-1 en células Huh7 tratadas con BNT162b2 indicó un aumento de la distribución de LINE-1 en el núcleo.
La PCR en ADN genómico de células Huh7 expuestas a BNT162b2 amplificó la secuencia de ADN exclusiva de BNT162b2. Nuestros resultados indican una rápida captación de BNT162b2 en la línea celular de hígado humano Huh7, lo que conduce a cambios en la expresión y distribución de LINE-1.
BNT162b2 es una vacuna de ARN modificado con nucleósidos (modARN) y encapsulado en nanopartículas lipídicas (LNP) que codifica la longitud completa de la proteína de la espiga (S) del SARS-CoV-2, modificada por dos mutaciones de prolina para garantizar una conformación antigénica óptima previa a la fusión, que imita al virus intacto para provocar anticuerpos neutralizantes del virus.
En consonancia con los ensayos clínicos aleatorizados, BNT162b2 mostró una alta eficacia en una amplia gama de resultados relacionados con COVID-19 en un entorno real.
No obstante, aún quedan muchos retos por delante, como el seguimiento de la seguridad y la eficacia a largo plazo de la vacuna.
Esto justifica nuevas evaluaciones e investigaciones.
El perfil de seguridad de BNT162b2 sólo está disponible actualmente a partir de estudios clínicos a corto plazo.
Se han notificado efectos adversos menos comunes de la BNT162b2, como pericarditis, arritmia, trombosis venosa profunda, embolia pulmonar, infarto de miocardio, hemorragia intracraneal y trombocitopenia. También hay estudios que informan de efectos adversos observados en otros tipos de vacunas. Para comprender mejor los mecanismos subyacentes a los efectos adversos relacionados con las vacunas, se necesitan investigaciones clínicas, así como análisis celulares y moleculares.
Un estudio reciente demostró que los ARN del SARS-CoV-2 pueden transcribirse inversamente e integrarse en el genoma de células humanas. Esto plantea la cuestión de si esto también puede ocurrir con el BNT162b2, que codifica parcialmente el ARN del SARS-CoV-2.
En consonancia con los ensayos clínicos aleatorizados, BNT162b2 mostró una alta eficacia en una amplia gama de resultados relacionados con COVID-19 en un entorno real.
No obstante, aún quedan muchos retos por delante, como el seguimiento de la seguridad y la eficacia a largo plazo de la vacuna.
Esto justifica nuevas evaluaciones e investigaciones.
El perfil de seguridad de BNT162b2 sólo está disponible actualmente a partir de estudios clínicos a corto plazo.
Se han notificado efectos adversos menos comunes de la BNT162b2, como pericarditis, arritmia, trombosis venosa profunda, embolia pulmonar, infarto de miocardio, hemorragia intracraneal y trombocitopenia. También hay estudios que informan de efectos adversos observados en otros tipos de vacunas. Para comprender mejor los mecanismos subyacentes a los efectos adversos relacionados con las vacunas, se necesitan investigaciones clínicas, así como análisis celulares y moleculares.
Un estudio reciente demostró que los ARN del SARS-CoV-2 pueden transcribirse inversamente e integrarse en el genoma de células humanas. Esto plantea la cuestión de si esto también puede ocurrir con el BNT162b2, que codifica parcialmente el ARN del SARS-CoV-2.
En los datos farmacocinéticos proporcionados por Pfizer a la Agencia Europea del Medicamento (EMA), se estudió la biodistribución del BNT162b2 en ratones y ratas mediante inyección intramuscular con LNP radiomarcada y modRNA de luciferasa.
Los resultados mostraron que el lugar de la inyección y el hígado eran los principales lugares de distribución, observándose concentraciones máximas a las 8-48 h posdosis.
Además, en los animales que recibieron la inyección de BNT162b2, se observaron efectos hepáticos reversibles, como agrandamiento del hígado, vacuolación, aumento de los niveles de gamma glutamil transferasa (γGT) y aumento de los niveles de aspartato transaminasa (AST) y fosfatasa alcalina (ALP).
Por lo tanto, en este estudio, nuestro objetivo es examinar el efecto de BNT162b2 en una línea celular de hígado humano in vitro e investigar si BNT162b2 puede ser transcrito inversamente en el ADN a través de mecanismos endógenos.
En este estudio, presentamos evidencia de que la vacuna de ARNm de COVID-19 BNT162b2 puede ingresar a la línea celular de hígado humano Huh7 in vitro.
El ARNm de BNT162b2 se transcribe de forma inversa intracelularmente en ADN tan rápido como 6 h después de la exposición a BNT162b2. Un posible mecanismo para la transcripción inversa es a través de la transcriptasa inversa endógena LINE-1, y la distribución de la proteína del núcleo de LINE-1 es elevada por BNT162b2. La acumulación intracelular de LNP en los hepatocitos se ha demostrado in vivo.
Un estudio preclínico sobre BNT162b2 mostró que BNT162b2 ingresa a la línea celular humana de células HEK293T y conduce a una expresión robusta del antígeno BNT162b2.
Por lo tanto, en este estudio, primero investigamos la entrada de BNT162b2 en las células Huh7 de la línea celular de hígado humano. La elección de las concentraciones de BNT162b2 utilizadas en este estudio merece una explicación. BNT162b2 se administra en una serie de dos dosis con tres semanas de diferencia y cada dosis contiene 30µg de BNT162b2 en un volumen de 0,3 ml, lo que hace que la concentración local en el sitio de inyección sea la más alta de 100µg/mL.
Un estudio anterior sobre las vacunas de ARNm contra los virus de la influenza H10N8 y H7N9 usando un sistema de administración de LNP similar mostró que la vacuna de ARNm puede distribuirse de forma bastante inespecífica a varios órganos como el hígado, el bazo, el corazón, los riñones, los pulmones y el cerebro, y la concentración en el hígado es aproximadamente 100 veces más bajo que el del sitio de inyección intramuscular.
En el informe de evaluación de BNT162b2 proporcionado a EMA por Pfizer, los estudios de distribución farmacocinética en ratas demostraron que una proporción relativamente grande (hasta el 18 %) de la dosis total se distribuye en el hígado.
Por lo tanto, elegimos usar 0.5, 1 y 2µg/ml de vacuna en nuestros experimentos con células hepáticas.
Sin embargo, el efecto de un rango más amplio de concentraciones más bajas y más altas de BNT162b2 también debe verificarse en estudios futuros.
En el estudio actual, empleamos una línea celular de hígado humano para la investigación in vitro. Vale la pena investigar si las células hepáticas también presentan la proteína espiga del SARS-CoV-2 derivada de la vacuna, lo que podría hacer que las células hepáticas sean objetivos para las células T citotóxicas reactivas a la proteína espiga previamente cebadas.
Ha habido informes de casos de personas que desarrollaron hepatitis autoinmune después de la vacunación con BNT162b2.
Para obtener una mejor comprensión de los efectos potenciales de BNT162b2 en la función hepática, se desean modelos in vivo para estudios futuros.
En el informe de toxicidad de BNT162b2, no se han proporcionado estudios de genotoxicidad ni carcinogenicidad. Nuestro estudio muestra que BNT162b2 se puede transcribir inversamente a ADN en la línea de células hepáticas Huh7, y esto puede generar la preocupación de que el ADN derivado de BNT162b2 se integre en el genoma del huésped y afecte la integridad del ADN genómico, lo que podría mediar potencialmente en la genotoxicidad. En esta etapa, no sabemos si el ADN transcrito de forma inversa a partir de BNT162b2 se integra en el genoma celular. Se necesitan más estudios para demostrar el efecto de BNT162b2 en la integridad genómica, incluida la secuenciación del genoma completo de las células expuestas a BNT162b2, así como tejidos de sujetos humanos que recibieron la vacuna BNT162b2.
El modelo celular que utilizamos en este estudio es una línea celular de carcinoma, con replicación de ADN activa que difiere de las células somáticas que no se dividen. También se ha demostrado que las células Huh7 muestran una expresión significativamente diferente de genes y proteínas, incluidas proteínas reguladas al alza involucradas en el metabolismo del ARN. Sin embargo, la proliferación celular también está activa en varios tejidos humanos, como la médula ósea o las capas basales del epitelio, así como durante la embriogénesis y, por lo tanto, es necesario examinar el efecto de BNT162b2 sobre la integridad genómica en tales condiciones.
Además, la retrotransposición efectiva de LINE-1 también se ha informado en células que no se dividen y diferenciadas terminalmente, como las neuronas humanas.
El informe de evaluación de Pfizer EMA también mostró que BNT162b2 se distribuye en el bazo (<1,1 %), las glándulas suprarrenales (<0,1 %), así como una radiactividad baja y medible en los ovarios y testículos (<0,1 %).
Además, no hay datos disponibles sobre la transferencia placentaria de BNT162b2 en el informe de evaluación de Pfizer EMA. Nuestros resultados mostraron que el ARNm de BNT162b2 entra fácilmente en las células Huh7 a una concentración (0,5µg/ml) correspondiente al 0,5 % de la concentración local en el lugar de la inyección, inducen cambios en la expresión del gen y la proteína LINE-1 y, en 6 h, se puede detectar la transcripción inversa de BNT162b2. Por lo tanto, es importante investigar más a fondo el efecto de BNT162b2 en otros tipos de células y tejidos, tanto in vitro como in vivo.
En este estudio se presenta evidencia sobre la entrada rápida de BNT162b2 en las células y la posterior transcripción inversa intracelular de ARNm de BNT162b2 en ADN.
